شناسایی اشریشیا کلی K99 از مدفوع گوساله های مبتلا به اسهال به روش PCR اسلاید آگلوتیناسیون در استان فارس

اسهال ناشی از اشریشیاکلیK99 در گوساله ها بویژه در نخستین روزهای پس از تولد ،به علت تلفات خسارات اقتصادی حاصله از اهمیت زیادی بر خوردار است. درصد متفاوتی از شیوع این عفونت در کشورها حتی مناطق مختلف یک کشور گزارش شده است، چنانچه در برخی کشور ها این باکتری از 30-40 درصد گوساله های مبتلا به اسهال در برخی دیگر از حدود 3-6درصد آنها جدا شده است. هدف از این مطالعه جداسازی شناسایی اشریشیا کلی K99 به روش PCR اسلاید آگلوتیناسیون به منظور تعیین شیوع این عفونت همچنین مقایسه کارایی این تکنیک ها می باشد.در طی این تحقیق مجموعا 149 سواپ رکتوم از گوساله های 1-30 روزه مبتلا به اسهال در مدت یک سال 1387-1388) با استفاده از محیط ترانسپورت از 15 گاوداری در سطح استان فارس جمع آوری شدند.در بدو ورود به آزمایشگاه، هر نمونه به دو بخش تقسیم گردید. یک بخش جهت استخراج DNA انجام multiplex PCRبرای شناسایی دو ژن فیمبریه K99 انتروتوکسین STaمستقیما مورد استفاده قرار گرفت بخش دیگر جهت کشت بر روی محیط های EMB ،مک کانکی مینکا برای جداسازی شناسایی اشریشیاکلی K99 همچنین بررسی وجود یا عدم وجود فیمبریه K99 به روش اسلاید آگلوتیناسیون مورد استفاده قرار گرفت. جهت انجام تست اسلاید آگلوتیناسیون از هر نمونه کشت داده شده بر روی محیط کشت مک کانکی بطور تصادفی برای ده کلونی صورتی رنگ (تخمیر کننده لاکتوز) تشکیل شده تست اسلاید آگلوتیناسیون با استفاده از آنتی بادی اختصاصی تجاری ضد فیمبریه K99 انجام گردید. نتایج PCR نشان داد که از 149 نمونه مدفوع اسهالی مورد آزمایش تنها نمونه (%5/3) از نظر داشتن دو ژن فیمبریه K99 انتروتوکسین STa مثبت بودند. نتایج بدست آمده از طریق آزمایش اسلاید آگلوتیناسیون، نیز نشان دهنده آگلوتیناسیون مثبت با آنتی بادی ضد فیمبریه K99 برای جدایه ای بود که در PCR مثبت بودند. از نتایج بدست آمده میتوان نتیجه گرفت که عفونت اسهال اشریشیاکلی K99 در استان فارس وجود داردو باید مورد توجه قرار گیرد. همچنین اگرچه هر دو روش PCR اسلاید آگلوتیناسیون یک میزان از شیوع را نشان دادند، اما با روش PCR میتوان بطور مستقیم اشریشیا کلی K99 را در نمونه های اسهالی با اختصاصیت بسیار بالا زمان بسیار کم در حد سه ساعت شناسایی کرد در حالیکه با روش کشت اسلاید آگلوتیناسیون نیاز به حداقل 24 ساعت زمان می باشد.