بهینه سازی تولید پروتئین نوترکیب کریپتوکروم DASH1 جلبک سبز Volvox carteri در باکتری Escherichia coli: بررسی حلالیت و اتصال به DNA
محل انتشار: فصلنامه بیوتکنولوژی کشاورزی، دوره: 10، شماره: 4
سال انتشار: 1397
نوع سند: مقاله ژورنالی
زبان: فارسی
مشاهده: 874
فایل این مقاله در 24 صفحه با فرمت PDF قابل دریافت می باشد
- صدور گواهی نمایه سازی
- من نویسنده این مقاله هستم
استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:
شناسه ملی سند علمی:
JR_JOAGK-10-4_009
تاریخ نمایه سازی: 20 خرداد 1398
چکیده مقاله:
هدف: اپتوژنتیک به عنوان یک شاخه علمی جدید، از فتورسپتورها به منظور اجرای تحقیقات پایه ای و کاربردی استفاده می کند. یکی از راه های توسعه اپتوژنتیک، شناسایی فتورسپتورهای جدید و تعیین خصوصیات آن هاست. کریپتوکروم های DASH متعلق به خانواده پروتئینی کریپتوکروم/فتولیاز، فتورسپتورهای دارای قابلیت ترمیم DNA بوده و در مسیرهای پیام رسانی علامت نقش دارند. هدف این تحقیق، تولید کافی پروتئین پیش گویی شده کریپتوکروم DASH1 ولوکس (VcCryDASH1)، برای استفاده در مطالعات طیف جذبی و نیز بررسی قابلیت ترمیم DNA می باشد. مواد و روشها: ابتدا توالی کدکننده پروتئین VcCryDASH1 با استفاده از آغازگرهای اختصاصی، از کتابخانه cDNA جلبک Volvox carteri جداسازی و در پلاسمید بیانی pGEX-2TK همسانه سازی شد. تولید پروتئین نوترکیب در دو سویه متفاوت باکتری E. coli و همچنین تحت تاثیر زمان های مختلف القاء با IPTG و همچنین میزان انحلال پذیری آن توسط روش SDS-PAGE مورد ارزیابی قرار گرفت. بررسی قابلیت اتصال به DNA در این پروتئین، با روش همردیف سازی انجام شد. نتایج: تولید کافی پروتئین، در سویه Rosetta، در °C32، و زمان القاء بیش از 3 ساعت بدست آمد. در زمان القاء 1 و 3 ساعت، نیمی از پروتئین به صورت نامحلول بود. همردیف سازی پروتئین VcCryDASH1 مشخص نمود که درصد بالایی از آمینواسیدهای متصل شونده به DNA، در این پروتئین حضور دارند. نتیجه گیری: این نتایج نشان می دهند که پروتئین VcCryDASH1 تحت شرایط بهینه ، دارای قابلیت انحلال پذیری دوگانه بوده اما روش ما می تواند مقدار کافی آن را در باکتری E. coli سویه Rosetta تولید کند. همچنین بدلیل داشتن آمینواسیدهای حفاظت شده ، این پروتئین دارای قابلت اتصال به DNA می باشد که آن را به عنوان یک منبع احتمالی جهت طراحی مولکول های میانجی نور-DNA در اپتوژنتیک معرفی می نماید.
کلیدواژه ها:
نویسندگان
سعید مهدوی
دانشجوی دکتری تخصصی فیزیولوژی گیاهی، گروه زیست شناسی گیاهی، دانشکده علوم طبیعی، دانشگاه تبریز، تبریز، ایران
جعفر رازقی
گروه زیست شناسی گیاهی، دانشکده علوم طبیعی، دانشگاه تبریز، تبریز، ایران
مقصود پژوهنده
دانشیار، گروه بیوتکنولوژی دانشکده کشاورزی، دانشگاه شهید مدنی آذربایجان، کیلومتر ۳۵ جاده تبریز- آذر شهر، ایران
آرش کیانیان مومنی
دانشیار، گروه زیست شناسی سلولی و تکوینی گیاهی، دانشگاه بیله فلد، بیله فلد، آلمان
مراجع و منابع این مقاله:
لیست زیر مراجع و منابع استفاده شده در این مقاله را نمایش می دهد. این مراجع به صورت کاملا ماشینی و بر اساس هوش مصنوعی استخراج شده اند و لذا ممکن است دارای اشکالاتی باشند که به مرور زمان دقت استخراج این محتوا افزایش می یابد. مراجعی که مقالات مربوط به آنها در سیویلیکا نمایه شده و پیدا شده اند، به خود مقاله لینک شده اند :