تهیه آنتی بادی های نوترکیب مونوکلونال بر علیه قارچ Polymyxa betae
صاحب اثر: سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی
نوع محتوی: طرح پژوهشی
زبان: فارسی
استان موضوع گزارش: البرز
شهر موضوع گزارش: کرج
شناسه ملی سند علمی: R-1059329
تاریخ درج در سایت: 27 بهمن 1397
دسته بندی علمی: علوم کشاورزی
مشاهده: 229
تعداد صفحات: 62
سال انتشار: 1390
نسخه کامل طرح پژوهشی منتشر نشده است و در دسترس نیست.
- من نویسنده این مقاله هستم
استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:
چکیده طرح پژوهشی:
بیماری رایزومانیا یکی از مخرب ترین بیماریصهای ویروسی چغندر قند است. در این بیماری عملکرد کمی و کیفی چغندرقند تحت تاثیر قرار میصگیرد. این بیماری توسط ویروس beet necrotic yellow vein virus ایجاد میشود. انتقال طبیعی این ویروس صرفا توسط شبه قارچ Polymyxa betaeصورت میصپذیرد. ایجاد روش های شناسایی برای تشخیص حضور قارچ در گیاه و همچنین خاک های آلوده می تواند در مطالعات پیش آگاهی و اپیدمیولوژیک و همچنین در شناسایی منابع مقاومت مورد استفاده قرار گیرد. تحقیق حاضر جهت تولید آنتی بادی های مونوکلونال نوترکیب به منظور شناسایی این قارچ در گیاهان آلوده صورت پذیرفته است. در گام اول برای تولید آنتی بادی، انتخاب ایمونوژن اختصاصی برای پاتوژن مورد نظر الزامی میباشد. برای این منظور در این تحقیق از پروتیین گلوتاتیون- ا س- ترانسفراز (GST)که در تمامی حالتصهای مورفولوژیکی P. betae وجود دارد به عنوان آنتی ژن برای تولید آنتی بادی و همچنین شناسایی قارچ استفاده گردیده است. پروتیین GST در حالت اصلی خود به میزان زیاد در سلول ها موجود می باشد و باعث سم زدایی از ترکیبات مضر در داخل سلول ها می گردد. بیان و تولید انبوه پروتیین GST در باکتری اشریشیاکلی صورت پذیرفت. خالصصسازی پروتیین نوترکیب GST با استفاده از روش کروماتوگرافی تمایلی بر روی ستون نیکل صورت پذیرفت. تکنولوژی نمایش فاژی برای تولید آنتی بادی نوترکیب مونوکلونال استفاده گردید. برای این منظور از پروتیین خالص GST برای غربال گری کتابخانه فاژی آنتی بادی استفاده گردید. فاژ های حاوی آنتی بادی اختصاصی در مراحل مختلف غربال گری جدا سازی و تکثیر گردیده و پس از 3 دور غربال گری، این فاژها با استفاده از روش الیزا جداسازی گردیدند. آنتی بادی های موجود در سطح فاژ ها از نوع نواحی متغیر متصل به هم (scFv) بوده که پس از جداسازی کلون های مولد، تنوع آنها با استفاده از روش های RFLP و تعیین ترادف مورد بررسی قرار گرفتند. آنالیزهای تکمیلی وسترن بلاتینگ و الیزا بر روی scFv های اختصاصی منفرد و با استفاده از عصارهصهای سالم و آلوده چغندرقند انجام شدند. نتایج این تحقیق حاکی از جداسازی دو نوع آنتی بادی مونوکلونال نوترکیب اختصاصی بر علیه شبه قارچ P. betae می باشد. کلمات کلیدی: چغندرقند، رایزومانیا، آزمون الیزا، آنتیصبادی مونوکلونال نوترکیب، نمایش فاژی