بیان و تعیین خصوصیت آنزیم نوترکیب آلکالین سرین پروتئاز جدید

پروتئازها یکی از مهمترین و پرکاربردترین آنزیم های پروتئولایتیک صنعتی هستند. امروزه برای تولید میزان مناسب آنزیم از روش نوترکیب استفاده می شود. در مطالعه حاضر، یک ژن جدید مربوط به آلکالین سرین پروتئاز از سویه وحشی Bacillus sp RAM۵۳ که در مطالعه پیشین جداسازی ، شناسایی و همسانه سازی شده بود در میزبان E. coli BL۲۱ بیان گردید. شرایط بیان آنزیم نوترکیب از جمله زمان مناسب کشت و القا آن و میزان القا و زمان مناسب کشت بعد از القا بهینه سازی شد. آنزیم نوترکیب از عصاره سلولی استخراج شد و به روش کروماتوگرافی تمایلی با استفاده از رزین pure Co-sepharose خالص سازی گردید و برخی از خصوصیات آنزیمی از جمله فعالیت و پایداری در برابر دما و pH های مختلف و همچنین برخی ترکیبات مهار کننده و دترجنت مورد بررسی قرار گرفتند . نتایج نشان دادند که میزان فعالیت به دست آمده از آنزیم خالص ۰.۱ Unit/ml بود. آنزیم علاوه بر فعالیت در دماهای مختلف در ۶۰ تا ۷۰ درجه سانتی گراد حدود ۵۰ % از فعالیت خود را پس از ۳ ساعت حفظ نموده است . همچنین میزان فعالیت باقی مانده آنزیم در pH های ۷، ۸ و ۹ قابل توجه بوده و پس از ۴۸ ساعت بیش از ۸۰ درصد حفظ شده بود و همچنین در pH های قلیایی بالاتر از ۱۰ نیز پایداری قابل توجهی بیش از ۵۰ درصد را نشان داد. در تیمار با SDS و پراکسید هیدروژن میزان فعالیت آنزیم تا ۱۷۴ درصد افزایش یافت . با توجه به پایداری و حفظ فعالیت در دمای بالا و pH خنثی تا قلیایی در مقایسه با آنزیم های همتای تجاری می توان آن را برای صنعت شوینده ها مناسب دانست .